ستون HPLC

ستون HPLC

ستون HPLC | ستون کروماتوگرافی مایع | خرید ستون HPLC | فروش ستون HPLC | قیمت ستون HPLC | ستون کروماتوگرافی مایع | ستون کروماتوگرافی مایع | خرید | خرید | فروش | فروش | خرید | قیمت | قیمت ستون HPLC | خرید | خرید | خرید | قیمت

کروماتوگرافی یک روش تحلیلی است که اجزا را در مخلوط جدا می کند. ستون های کروماتوگرافی بخشی از ابزار دقیق هستند که در کروماتوگرافی استفاده می شوند. پنج روش کروماتوگرافی که از ستون استفاده می کنند عبارتند از: کروماتوگرافی گازی (GC)، کروماتوگرافی مایع (LC)، کروماتوگرافی تبادل یونی (IEC)، کروماتوگرافی size exchange (SEC) و کروماتوگرافی کایرال. اصول اساسی کروماتوگرافی را می توان برای هر پنج روش اعمال کرد.

ستون های کروماتوگرافی گازی

در کروماتوگرافی گازی فاز متحرک یک گاز است. ستون های کروماتوگرافی گازی معمولاً بین ۱ تا ۱۰۰ متر طول دارند.

HPLC

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) نوعی کروماتوگرافی مایع است که از فاز محرک مایع استفاده می کند. اصول اولیه از کروماتوگرافی گازی در کروماتوگرافی مایع اعمال می شود. سه نوع اساسی از ستون های کروماتوگرافی مایع وجود دارد: مایع مایع، مایع جامد و تبادل یونی.ستون های کروماتوگرافی مایع مایع دارای فاز ساکن مایع هستند که به سطح ستون یا مواد بسته بندی شده پیوند خورده یا جذب می شوند. ستون های کروماتوگرافی مایع مایع به این دلیل محبوب نیستند که ثبات کمی دارند. پارتیشن بندی بین دو مایعات مختلف فاز متحرک و ثابت رخ می دهد.در ستون های کروماتوگرافی مایع جامد، فاز ساکن یک جامد است و آنالیت بر روی فاز ساکن جذب می شود که اجزای مخلوط را جدا می کند.در ستون های کروماتوگرافی تبادل یونی، فاز ثابت یک رزین تبادل یونی است و با مبادلات یونی که بین فاز آنالیت و ثابت رخ می دهد، جداسازی انجام می شود.معمولاً HPLC یک ستون محافظ جلوتر از ستون تحلیلی دارد تا از ستون تحلیلی محافظت کند. ستون محافظ، ذرات معلق، آلودگی ها و مولکول هایی را که برگشت ناپذیر به ستون متصل می شوند، از بین می برد. ستون محافظ یک فاز ثابت شبیه به ستون تحلیلی دارد.

خصوصیات ستون HPLC

رایج ترین ستون های HPLC از فولاد ضد زنگ ساخته می شوند، اما می توانند از شیشه های ضخیم، پلیمرهایی مانند پلی اتیل اتلکتون، ترکیبی از فولاد ضد زنگ و شیشه یا ترکیبی از فولاد ضد زنگ و پلیمرها ساخته شوند. طول ستون های تحلیلی HPLC معمولی بین ۳ تا ۲۵ سانتی متر و قطر آنها ۱ تا ۵ میلی متر است. ستون ها معمولاً برخلاف ستون های GC مستقیم هستند. قطر ذرات بسته بندی شده ستون ها بین ۳ تا ۵ میکرومتر است. با کاهش قطر ذرات بسته بندی شده درون ستون، ستون های کروماتوگرافی مایع کارایی خود را افزایش می دهند.خصوصیات فیزیکی مولکول های هدف (آنالیت ها) مناسب ترین ستون HPLC را برای یک جداسازی معین تعیین می کنند. خصوصیات مولکولی که بر انتخاب ستون HPLC تأثیر می گذارد شامل آبگریزی / آب دوستی ، نیروهای بین مولکولی (به ویژه دو قطبی-دو قطبی)، نیروهای درون مولکولی (یونی) و اندازه است. به طور کلی، ساختار و شیمی بسته بندی ستون HPLC فاز ساکن مشخصات شستشوی آنالیت را تعیین می کند.اندازه ستون های HPLC از مویرگ تا مقیاس فرآیند متغیر است. قطر داخلی (ID) و حجم ستون هم میزان بارگیری نمونه بر روی ستون و هم میزان حساسیت جداسازی را تعیین می کند.

مواد پر کننده ستون HPLC

ستون های HPLC معمولاً با ذرات غشاء دار (پوسته ای) یا متخلخل بسته بندی می شوند. ذرات پوسته ای از پلیمر یا دانه های شیشه ساخته می شوند. ذرات پوسته ای توسط یک لایه نازک یکنواخت از سیلیس، رزین مصنوعی پلی استایرن-دیوینیل-بنزن، آلومینا یا نوع دیگر رزین تبادل یونی احاطه شده اند. قطر دانه های پوسته ای بین ۳۰ تا ۴۰ میکرومتر است. ذرات متخلخل معمولاً مورد استفاده قرار می گیرند و قطر آن ها بین ۳ تا ۱۰ میکرومتر است. ذرات متخلخل از سیلیس، رزین مصنوعی پلی استایرن-دیوینیل-بنزن، آلومینا یا نوع دیگر رزین تبادل یونی تشکیل شده اند. سیلیس متداولترین نوع مواد بسته بندی ذرات متخلخل است.بسیاری از انواع پرکننده های مورد استفاده برای کروماتوگرافی گرانش یا فشار کم قادر به تحمل فشارهای زیاد مورد استفاده در سیستم HPLC نیستند.استفاده از مهره های با قطر کوچکتر به دلیل افزایش سطح باعث افزایش حساسیت جداسازی می شود. با این وجود، با کاهش قطر مهره برای دبی مشخص، فشار ستون افزایش می یابد و یک حد پایین تر برای اندازه مهره ایجاد می کند.ستون های اولیه HPLC با ذرات سیلیس با شکل نامنظم پر می شدند تا سطح آن ها افزایش یابد. در حال حاضر، سیلیس متخلخل کروی برای اکثر موارد جایگزین سیلیس نامنظم شده است. شکل کروی باعث افزایش کارایی و فشار کمتری می شود و تخلخل باعث افزایش سطح می شود. رزین های پلیمری بسیار متقاطع هستند و به ویژه برای جداسازی در مواردی که PH خارج از محدوده عملیاتی بسته بندی سیلیس باشد بسیار مفید است.

فاز معکوس و عادی HPLC

یک فاز ثابت قطبی و یک فاز متحرک غیر قطبی برای HPLC فاز نرمال استفاده می شود. در فاز طبیعی، متداولترین گروه های R متصل به سیلوکسان عبارتند از: دیول، آمینو، سیانو، اکسیدهای غیرآلی و دی متیل آمینو. فاز نرمال نیز نوعی کروماتوگرافی مایع جامد است. هنگام انجام فاز عادیHPLC، بیشتر ترکیبات غیر قطبی ابتدا شسته می شوند.فاز معکوس HPLC از یک فاز متحرک قطبی و یک فاز ثابت غیر قطبی استفاده می کند. فاز معکوس HPLC متداول ترین روش کروماتوگرافی مایع است که استفاده می شود. گروه های R معمولاً برای HPLC فاز معکوس به سیلوکسان متصل می شوند: C8 ، C18 یا هر هیدروکربن. فاز معکوس همچنین می تواند از آب به عنوان فاز متحرک استفاده کند، که به دلیل ارزان بودن آب، غیر سمی بودن و نامرئی بودن آب در ناحیه UV سودمند است. هنگام انجام HPLC فاز معکوس، قطبی ترین ترکیبات ابتدا شسته می شوند.

انواع ستون HPLC

اکنون طیف گسترده ای از انواع ستون HPLC برای کاربردهای مختلف تحلیلی در دسترس است. چند نوع از متداول ترین موارد HPLC که بر اساس توسط مکانیسم جداسازی طبقه بندی شده اند ارائه شده است.

ستون کروماتوگرافی تعویض یونی

یک ستون تبادل یونی می تواند کاتیونی یا آنیونی باشد. این نوع ستون HPLC مولکول های قطبی را بر اساس بار آنها جدا می کند. فاز متحرک بافر آبی است. ستون های HPLC تبادل یونی می توانند برای جداسازی انواع مختلف آنالیت ها مورد استفاده قرار گیرند و معمولاً برای جداسازی کربوهیدرات ها، اسیدهای آمینه و پروتئین ها استفاده می شوند. کروماتوگرافی تبادل یونی و تبادل لیگاند ممکن است در یک ستون ترکیب شود. در این ستون های حالت ترکیبی، تبادل یونی معمولاً از طریق یون های فلزی انجام می شود و لیگاند ها مولکول های دهنده الکترون مانند گروه های هیدروکسیل یا آمین ها هستند. این نوع ستون HPLC اغلب برای جداسازی مونوساکاریدها استفاده می شود.

ستونهای تبادل یونی برای جداسازی یون ها و مولکول هایی استفاده می شوند که به راحتی یونیزه شوند. جداسازی یون ها به میل یون برای فاز ثابت بستگی دارد که باعث ایجاد یک سیستم تبادل یونی می شود. فعل و انفعالات الکترواستاتیک بین آنالیت ها، فاز متحرک و فاز ساکن، به جداسازی یون های نمونه کمک می کند. فقط کمپلکس های دارای بار مثبت یا منفی می توانند با مبدل های کاتیونی یا آنیونی مربوطه تعامل داشته باشند. مواد بسته بندی معمول برای ستون های تبادل یونی، آمین ها، اسید سولفونیک، زمین دیاتومه، استایرن-دیوینیل بنزن و رزین های پلی استایرن متقابل هستند. برخی از اولین مبدل های یونی مورد استفاده غیر آلی بوده و از آلومینوسیلیکات (زئولیت) ساخته شده اند. اگرچه آلومینوسیلیکات ها به عنوان رزین های تبادل یونی مورد استفاده زیاد مورد استفاده قرار نمی گیرند.

ستون های کروماتوگرافی Size Exclusion

استثنای اندازه ستون های کروماتوگرافی، مولکول ها را بر اساس اندازه و نه وزن مولکولی جدا می کنند. ماده بسته بندی معمول این ستون ها غربال های مولکولی است. زئولیت ها یک غربال مولکولی رایج است که مورد استفاده قرار می گیرد. غربال های مولکولی منافذی دارند که مولکول های کوچک می توانند وارد آن شوند، اما مولکول های بزرگ نمی توانند. این امر اجازه می دهد تا مولکول های بزرگتر سریعتر از مولکول های کوچکتر از ستون عبور کنند. سایر مواد بسته بندی برای ستون های کروماتوگرافی استثنای اندازه، پلی ساکاریدها و سایر پلیمرها و سیلیس هستند. اندازه منافذ برای جداسازی اندازه حذف بین ۴ و ۲۰۰ نانومتر متفاوت است.

ستون های Chiral

ستون های Chiral برای جداسازی انانتیومرها استفاده می شود. جداسازی مولکول های کایرال براساس استریوشیمی انجام می شود. این ستون ها فاز ساکن دارند که به طور انتخابی با یک انانتیومر بر دیگری تعامل دارند. این نوع ستون ها برای جداسازی مخلوط راسماز بسیار مفید هستند.

منابع :

https://www.bio-rad.com/featured/en/hplc-columns.html

https://www.pharmaguideline.com/2016/01/different-types-of-columns-used-in-hplc.html#:~:text=Columns%20are%20the%20main%20component,comes%20out%20from%20the%20column.&text=The%20material%20filled%20in%20the,known%20as%20a%20stationary%20phase.

https://chem.libretexts.org/Bookshelves/Analytical_Chemistry/Supplemental_Modules_(Analytical_Chemistry)/Instrumental_Analysis/Chromatography/Chromatographic_Columns

اوج آزما پلاست درزمینه فروش تجهیزات آزمایشگاهی ازجمله ستون HPLC یا کروماتوگرافی مایع ازبرندهای معتبر فعالیت دارد.جهت کسب اطلاعات بیشتراز قیمت و خرید باماتماس بگیرید. (اینجا کلیک کنید).