یکی از روش های متداول برای سنجش DNA ی RNA، استفاده از آنالیز اسپکتروفتومتری با استفاده از دستگاه اسپکتروفتومتر است. دستگاه اسپکتروفتومتر قادر به تعیین غلظت متوسط اسیدهای نوکلئیک DNA یا RNA موجود در مخلوط و همچنین خلوص آنها است. نانو دراپ یک اسپکتروفتومتر آزمایشگاهی رایج است که زمان آماده سازی و پاکسازی نمونه DNA,RNA و یا پروتئین را در مقایسه با آنچه برای خواندن فقط یک نمونه در یک کووت سنتی لازم است کاهش می دهد.
نانو دراپ
دستگاه نانو دراپ | فروش نانو دراپ | قیمت نانو دراپ | خرید نانو دراپ | خرید | فروش | قیمت | خرید | خرید دستگاه نانو دراپ | فروش | فروش دستگاه نانو دراپ | قیمت | قیمت دستگاه نانو دراپ | دستگاه نانو دراپ چیست | چیست | چیست | دستگاه نانو دراپ چیست
اسپکتروفتومتری
در زیست شناسی مولکولی، برای تعیین غلظت های متوسط DNA یا RNA موجود در یک مخلوط و همچنین خلوص آن ها، معمولاً کمی سازی اسیدهای نوکلئیک انجام می شود. واکنش هایی که از اسیدهای نوکلئیک استفاده می کنند اغلب برای عملکرد مطلوب به مقادیر و خلوص خاصی نیاز دارند. تا به امروز، دو روش اصلی وجود دارد که دانشمندان برای کمیت یا ایجاد غلظت اسیدهای نوکلئیک (مانند DNA یا RNA) در محلول استفاده می کنند. این روش ها کمی سازی بر اساس اسپکتروفتومتری و نشانه گذاری UV فلورسانس در حضور یک رنگ DNA است.
امروزه کمی کردن غلظت نمونه DNA ، RNA یا پروتئین به آسانی با فشار دادن یک دکمه امکان پذیر شده است.تجزیه و تحلیل اسپکتروفتومتری بر اساس اصولی است که جذب نوری اسیدهای نوکلئیک را محدوده طول موج ماورابنفش در یک الگوی خاص جذب می کنند. در مورد DNA و RNA، یک نمونه در معرض نور ماورا بنفش با طول موج ۲۶۰ نانومتر (nm) قرار می گیرد و یک آشکارساز عکس نوری را که از طریق نمونه عبور می کند اندازه گیری می کند. مقداری از نور ماورا بنفش عبور کرده و بخشی دیگر توسط DNA / RNA جذب می شود. هرچه نور بیشتری توسط نمونه جذب شود، غلظت اسید نوکلئیک در نمونه بیشتر می شود. نتیجه حاصل این است که نور کمتری به آشکارساز نوری برخورد می کند و این باعث ایجاد چگالی نوری بالاتر (OD) می شود.
با استفاده از قانون Beer – Lambert می توان مقدار نور جذب شده را به غلظت مولکول جذب کننده مرتبط کرد. در طول موج ۲۶۰ نانومتر، میانگین ضریب انقراض برای DNA دو رشته ۰.۰۲۰ (میکروگرم در میلی لیتر)، برای DNA تک رشته ۰.۰۲۷ (میکروگرم در میلی لیتر)، برای یک RNA رشته ای ۰.۰۲۵ (میکروگرم در میلی لیتر) است و برای الیگونوکلئوتیدهای تک رشته کوتاه به طول و ترکیب باز بستگی دارد. بنابراین، میزان جذب مربوط به غلظت ۵۰ میکروگرم بر میلی لیتر برای DNA دو رشته است.
نانو دراپ
این دستگاه یک اسپکتروفتومتر آزمایشگاهی رایج است. زمان کمتر آماده سازی و پاکسازی در مقایسه با آنچه برای خواندن فقط یک نمونه در یک کووت سنتی لازم است به این معنی است که شما می توانید چندین نمونه را در کمتر از یک دقیقه اندازه بگیرید. نانو دراپ اندازه گیری در یک طیف گسترده نوری که گستره اشعه ماورا UV بنفش و نور مرئی است به خوبی انجام می دهد. نانو دراپ یک دستگاه اسپکتروفتومتری است که با دقت و قابلیت تکرار بالا نمونه های ۰.۵-۲ میلی لیتری را اندازه گیری می کند.نانو دراپ بر اساس قانون Beer عمل می کند.وقتی نور تک رنگ (نور با طول موج خاص) از یک محلول عبور می کند، معمولاً بین غلظت املاح و شدت نور منتقل شده رابطه کمی وجود دارد، یعنی هرچه نمونه غلظت بیشتری داشته باشد، نور کمتری نیز از طریق آن منتقل می شود.
برای تبدیل OD به غلظت نمونه های ناشناخته اسید نوکلئیک از واحدهای جذب زیر به فاکتورهای تبدیل غلظت اسید نوکلئیک استفاده می شود:
A260 dsDNA = 50 µg/ml
A260 ssDNA = 33 µg/ml
A260 ssRNA = 40 µg/ml
قبل از خرید دستگاه اسپکتروفتومتر NanoDrop، ما عادت کرده بودیم از کووت ها و همه موارد مربوط به آنها استفاده کنیم. اما سادگی استفاده از NanoDrop برای اندازه گیری RNA و DNA حیرت انگیز است. حجم نمونه یک میکرولیتر به صرفه جویی فوق العاده ای در پروب تبدیل می شود. این امر به ویژه در کارهایی که از RNA جدا شده از نمونه برداری از بافت استفاده می شود بسیار مهم است، بنابراین هر نانوگرم RNA را با ارزش می کند. همچنین، به دلیل اینکه نمونه را می توان به سادگی با پاک کردن قطره از سطح اندازه گیری حذف کرد، می توان تعداد زیادی از نمونه ها را در یک دوره نسبتاً کوتاه تجزیه و تحلیل کرد.
برخلاف سایر دستگاه های اسپکتروفتومتر کوچک، نانو دراپ قادر به اسکن نمونه ها در محدوده ۲۲۰-۷۵۰nm است. این یک ویژگی خوب است زیرا می تواند اطلاعات تحلیلی مهمی (مانند بررسی کارایی ترکیب رنگ) را فراهم کند.برای برخی از کاربران، نیاز به اتصال NanoDrop به کامپیوتر می تواند یک ضرر محسوب شود. این در درجه اول به دلیل فضای مورد نیاز برای تنظیم کل سیستم است. امکان بایگانی اندازه گیری ها، به صورت گرافیکی، این اشکال را جبران می کند. در هنگام اندازه گیری، گاهی اوقات با پیام خطای عجیبی روبرو می شویم، با این حال، متوجه شدیم که با راه اندازی مجدد کامپیوتر معمولاً مشکل حل می شود.
روی هم رفته، NanoDrop دستگاهی قدرتمند و پیشرفته برای اندازه گیری غلظت DNA و RNA است. برای آزمایشگاه هایی که تقاضای زیادی برای تجزیه و تحلیل نمونه دارند، این ابزار یک راه حل مقرون به صرفه است که در مدت زمان بسیار کوتاهی هزینه خود را پرداخت خواهد کرد.
اصول کار با دستگاه نانو دراپ
این دستگاه به طور خودکار نمی تواند برای شما تعیین کند که نمونه حاوی DNA ، RNA یا پروتئین است. شما باید قبل از شروع اندازه گیری به نرم افزار بگویید تا بتواند غلظت دقیق را گزارش دهد. اگر در شرایطی اتفاق افتادید که نیمی از نمونه های RNA خود را در تنظیمات پیش فرض اندازه گیری کرده اید، می توانید با بازخوانی هر نمونه در تنظیمات نرم افزار صحیح، دوباره کار را شروع کنید.
سیستم نگهداری نمونه در اسپکتروفتومتری NanoDrop از کشش سطحی استفاده می کند تا نمونه را در جای خود بین دو فیبر نوری نگه دارد. این امکان اندازه گیری نمونه های بسیار غلیظ بدون نیاز به رقت را فراهم می کند. با استفاده از این فناوری، طیف سنج های طیف سنج NanoDrop طیف کامل (۱۹۰ – ۸۴۰ نانومتر) توانایی اندازه گیری غلظت نمونه را تا ۲۰۰ برابر بیشتر از نمونه های اندازه گیری شده با استفاده از کووت استاندارد دارند.عامل اصلی این اسپکتروفتومتر پیشرفته، فناوری منحصر به فرد نگهداری نمونه آن است که هنگام اندازه گیری، نیاز به کووت را برطرف می کند.
روش آماده سازی نمونه و خوانش دستگاه نانو دراپ
مقدار۱-۲ میکرولیتر از نمونه روی صفحه خوانش نانو دراپ قرار می گیرد.
ممکن است برای نمونه های اسید نوکلئیک و پروتئین، حجم حجم کمتر از ۰.۵ میکرولیتر استفاده شود.
یک کابل فیبر نوری (فیبر گیرنده) درون این صفحه تعبیه شده است.
سپس یک کابل فیبر نوری دوم (فیبر منبع) با نمونه مایع تماس می گیرد و باعث می شود مایع شکاف بین انتهای دو فیبر را پر کند.
یک لامپ فلش زنون پالس منبع نور را فراهم می کند و یک طیف سنج با استفاده از یک آرایه CCD خطی، نور عبوری از نمونه را تجزیه و تحلیل می کند.
– این ابزار توسط نرم افزار مبتنی بر رایانه کنترل می شود و داده ها در پرونده های کتاب کار (* .twbk) در رایانه ذخیره می شوند.
‘Blanking’ پس زمینه ذاتی دستگاه و حلال شما را اندازه گیری می کند. اگر از NanoDrop برای اندازه گیری نمونه های خود استفاده می کنید، ۱-۲ میکرولیتر مینی DNA از پیش آماده شده را روی صفحه خوانش قرار دهید. درب ظرف را ببندید و اندازه گیری را کلیک کنید، اطمینان حاصل کنید که غلظت و خلوص را ثبت کنید.
منابع :
https://www.addgene.org/protocols/dna-quantification/
https://upendrats.blogspot.com/2018/01/nanodrop.html
https://bitesizebio.com/25329/strengths-and-limitations-of-your-nanodrop/
جهت کسب اطلاعات بیشتر و خرید نانودراپ با ما تماس بگیرید.
درباره ما
شرکت اوج آزما پلاست در سال 1392 در ایران تاسیس گردید. هدف اصلی همکاران ما کوشش در جهت بالابردن سطح سلامت در جامعه جهانی است. شرکت اوج آزما پلاست در زمینه واردات و تولیدات تجهیزات و ملزومات آزمایشگاهی و بیمارستانی فعالیت داشته و از ابتدای شروع فعالیت همواره ادامه