کوماسی بریلینت بلو

کوماسی بریلینت بلو | خرید کوماسی بریلینت بلو | فروش کوماسی بریلینت بلو | قیمت کوماسی بریلینت بلو | خرید | فروش 

Coomassie Brilliant Blue R-250

Coomassie Brilliant Blue G-250

کو ماسی برلینت بلو(CBB)

 کوماسی بریلینت بلو نام دو رنگ مشابه تری فنیل متان است که برای استفاده در صنعت نساجی تولید شده اند اما اکنون برای رنگ آمیزی پروتئین ها در بیوشیمی تحلیلی استفاده می شود.

Coomassie Brilliant Blue G-250 با افزودن دو گروه متیل از Coomassie Brilliant Blue R-250 متمایز شده است. نام “Coomassie” علامت تجاری ثبت شده صنایع شیمیایی امپریال است. انواع مختلف رنگ کوماسی موجود است.

این رنگ ها به عنوان Coomassie Brilliant Blue R-250 یا G-250 شناخته می شوند. که در آن R به معنای قرمز بیشتر و G برای رنگ سبز بیشتر در رنگ است. در شکل آنیونی آن، رنگ CBB با پروتئین ها یک مجموعه آبی پایدار را تشکیل می دهد.

پسوند “R” به نام Coomassie Brilliant Blue R-250 مخفف Red است زیرا رنگ آبی دارای رنگ مایل به قرمز است. برای نوع “G” رنگ آبی سبزتر است. “۲۵۰” در اصل خلوص رنگ را نشان می دهد.

رنگ دو نوع کوماسی بریلینت بلو به اسیدیته محلول بستگی دارد. فرم رنگ”G”  به طور دقیق مورد مطالعه قرار گرفته است. در pH کمتر از ۰، کوماسی بریلینت بلو دارای رنگ قرمز با حداکثر جذب در طول موج ۴۶۵ نانومتر است. در PH در حدود ۱ رنگ سبز با حداکثر جذب در ۶۲۰ نانومتر است در حالی که بالای pH 2 رنگ آبی روشن با حداکثر ۵۹۵ نانومتر است.

رنگ های مختلف نتیجه حالت های مختلف بار مولکول های رنگ است. در رنگ کوماسی بریلینت بلو به فرم قرمز، هر سه اتم ازت بار مثبت دارند. دو گروه اسید سولفونیک دارای pKa بسیار کم هستند و به طور معمول دارای بار منفی خواهند بود، بنابراین در pH حدود صفر رنگ، یک کاتیون با بار کلی ۱+ خواهد بود. رنگ سبز مربوط به نوعی رنگ است که بدون بار کلی است.

در محیط خنثی (PH 7)، فقط اتم نیتروژن قسمت دی فنیل آمین یک بار مثبت را حمل می کند و مولکول رنگ آبی یک آنیون با بار کلی ۱- است. pKa برای از دست دادن دو پروتون به ترتیب ۱.۱۵ و ۱.۸۲ است. پروتون نهایی در شرایط قلیایی از بین می رود و رنگ آن به رنگ صورتی در می آید (pKa 12.4)

رنگ برهم کنش الکترواستاتیکی اما غیرکوالانتی با گروه های آمینو و کربوکسیل پروتئین دارد.مولکول های رنگ به پروتئین ها متصل می شوند و یک مجموعه پروتئین-رنگ را تشکیل می دهند. تشکیل کمپلکس، شکل آنیونی با بار منفی رنگ آبی را تثبیت می کند، حتی در شرایط اسیدی که بیشتر مولکول های محلول به شکل کاتیونی باشند.

این اساس روش Bradford است که یک روش تعیین پروتئین است که شامل اتصال رنگ Coomassie Brilliant Blue به پروتئین ها است. اتصال رنگ به یک پروتئین باعث تغییر در حداکثر جذب رنگ از ۴۶۵ به ۵۹۵ نانومتر می شود. افزایش جذب در ۵۹۵ نانومتر برای تعیین غلظت پروتئین کنترل می شود.

این رنگ همچنین با مواد شوینده آنیونی دو دسیل سولفات سدیم (SDS) یک کمپلکس تشکیل می دهد. تشکیل این مجموعه باعث ایجاد ثبات در شکل رنگ سبز خنثی می شود.

این اثر می تواند در تخمین غلظت پروتئین با استفاده از روش بردفورد تداخل ایجاد کند. همچنین این احتمال وجود دارد که مواد شوینده آنیونی برای اتصال به پروتئین با رنگ رقابت کند.

کاربردهای کوماسی بریلینت بلو

از کوماسی بریلینت بلو در روش Bradford، روش پروتئین رنگ سنجی، برای تعیین کمیت پروتئین های جدا شده با ژل استفاده می شود. این روش با تعیین تغییر میزان جذب Coomassie Brilliant Blue G-250 انجام می شود.

مقدار کمپلکس موجود در محلول به عنوان شاخص غلظت پروتئین با اندازه گیری شدت رنگ آبی پس از تثبیت استفاده می شود. این روش برای تعیین کمیت و تخمین پروتئین های مورد علاقه سریع، حساس و کاربرپسند است.

کوماسی بریلینت بلو یک روش گسترده برای تجسم معمول پروتئین های جدا شده روی ژل های پلی آکریل آمید است. این ماده یک رنگ آلی است که با آمینو اسیدهای اساسی مانند لیزین، هیستیدین ، ​​تیروزین و آرژنین کمپلکس می سازد. به طور کلی کوماسی بریلینت بلو بار منفی را به پروتئین ها منتقل می کند و باعث جدا شدن آنها از ژل پلی اکریل آمید می شود.

 رنگ آمیزی CBB قادر به شناسایی حداقل ۳۰ تا ۱۰۰ نانوگرم پروتئین است، اما می توان با انجام آن در دمای بالا حساسیت روش را بهبود بخشید. این آزمایش همچنین می تواند با انواع پروتئین ها و پلی پپتیدهای دارای وزن مولکولی بیشتر از ۳۰۰۰ مورد استفاده قرار گیرد. این روش سریع است و قابلیت تولید استفاده مجدد، حساسیت عالی و سهولت استفاده را دارد.

رنگ Coomassie Brilliant Blue G-250 به سه شکل آنیونی (آبی)، خنثی (سبز) و کاتیونی (قرمز) است. در یک محیط اسیدی، رنگ قرمز پس از اتصال به پروتئین مورد علاقه، به شکل آبی تبدیل می شود.

اگر هیچ پروتئینی به رنگ متصل نشود، محلول قهوه ای رنگ باقی خواهد ماند. لکه CBB از طریق فعل و انفعالات الکترواستاتیک با گروه کربوکسیل پروتئین توسط نیروی واندروالس و گروه آمینه یک مجموعه قوی و غیرکوالانسی ایجاد می کند.

در طول شکل گیری کمپلکس، فرم قرمز رنگ Coomassie ابتدا الکترون آزاد خود را به گروه های یونیزه روی پروتئین اهدا می کند که باعث ایجاد اختلال در حالت اصلی پروتئین و در معرض قرار گرفتن بخش های آبگریز آن می شود.

این بخش ها به صورت غیر کووالانسی از طریق نیروهای واندر والس به اجزای غیر قطبی رنگ متصل می شوند. فعل و انفعالات یونی پیوند را بیشتر تقویت می کند. این تشکیل کمپلکس امکان شناسایی پروتئین های جدا شده توسط ژل را فراهم می کند.

کوماسی بریلینت بلو می تواند با گروه کوچکی از اسیدهای آمینه تداخل کند: آرژنین، هیستیدین، لیزین، فنیل آلانین، تیروزین و تریپتوفان و آن را به یک لکه مفید برای تجزیه و تحلیل اثر انگشت برای شناسایی جنس بیولوژیکی مبدأ اثر انگشت تبدیل می کند.

خصوصیات فیزیکی و شیمیایی کوماسی بریلینت بلو

فرمول شیمیایی: نمک سدیم C_۴۷H_۵۰N_۳NaO_۷S_۲

جرم مولی: g/mol0.3

حلالیت در آب: کمی در آب سرد حل می شود و درآب گرم (به رنگ آبی روشن) قابل حل شدن است.

حلالیت در اتانول: محلول است

نکاتی درمورد کوماسی بریلینت بلو

هنگام دست زدن به کوماسی بریلینت بلو از دستکش و لباس محافظ استفاده کنید.

در صورت تماس چشمی کاملاً با آب بشویید.

در صورت مواجهه با پوست ممکن است باعث تحریک پوست شود.

محلول رنگ آمیزی را در ظرف محکم بسته نگه دارید و در مکانی خشک ، خنک و دارای تهویه مناسب نگهداری کنید.

از تخلیه در محیط جلوگیری کرده و در صورت ریختن بلافاصله آن را با آب بشویید.

منابع :

https://conductscience.com/coomassie-brilliant-blue-stain/